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ELISA四種檢測(cè)法優(yōu)缺點(diǎn)比較

  • 發(fā)布日期:2017-01-17      瀏覽次數(shù):1722
    •    ELISA四種檢測(cè)法優(yōu)缺點(diǎn)比較 
        ELISA檢測(cè)是一種廣泛應(yīng)用在測(cè)定液體樣本中的蛋白、抗體、或激素的免疫剖析技術(shù)。酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)的規(guī)范程序,通常是把蛋白、抗體、或激素等(即抗原)直接或是以捕捉抗體(capture Ab)固定在固相載體上,再參加一級(jí)檢測(cè)抗體(primarydetection Ab),構(gòu)成一個(gè)抗原抗體的復(fù)合物。若是該抗體現(xiàn)已用酶(enzyme)符號(hào)了,即可用來直接測(cè)定抗原的量,若無(wú),則可運(yùn)用另一個(gè)酶符號(hào)的二級(jí)抗體來測(cè)定抗原的量。測(cè)定抗原量的辦法是參加該酶的底質(zhì)(substrate),作用后發(fā)作呈現(xiàn)的色彩深淺和樣本中的抗原量呈正比的,依此原理計(jì)算出樣本中的抗原總量或濃度。
        1.直接法(direct ELISA)
        將抗原直接固定在固相載體上,參加酶符號(hào)的一級(jí)抗體,即可測(cè)定抗原總量,此一級(jí)抗體的特異性非常重要。
        優(yōu)勢(shì):操作手續(xù)簡(jiǎn)略,因無(wú)須運(yùn)用二抗可防止交互反響。
        缺陷:實(shí)驗(yàn)中的一抗都得用酶符號(hào),但不是每種抗體都適合做符號(hào),費(fèi)用相對(duì)進(jìn)步。
        2.間接法(indirect ELISA)
        此測(cè)定辦法與直接法相似,不一樣在于一級(jí)抗體沒有酶符號(hào),改用酶符號(hào)的二級(jí)抗體去辨識(shí)一級(jí)抗體來測(cè)定抗原量。
        優(yōu)勢(shì):二抗能夠加強(qiáng)信號(hào),并且有多種挑選能做不一樣的測(cè)定剖析。不加酶符號(hào)的一級(jí)抗體則能保存它zui多的免疫反響性。
        缺陷:交互反響發(fā)作的機(jī)率較高。
        3.雙抗體夾心法(sandwich ELISA)
        被檢測(cè)的抗原包被在兩個(gè)抗體之間,其間一個(gè)抗體將抗原固定于固相載體上,即捕捉抗體。另一個(gè)則是檢測(cè)抗體,此抗體可用酶符號(hào)后直接測(cè)定抗原的量;或不符號(hào),再透過酶符號(hào)的二級(jí)抗體來測(cè)定抗原的量。這兩種抗體有必要當(dāng)心選擇,才可防止交互反響或競(jìng)爭(zhēng)一樣的抗原部位。
        優(yōu)勢(shì):高活絡(luò)、高專一性,抗原無(wú)須事前純化。
        缺陷:抗原必定得具有兩個(gè)以上的抗體部位。
        4.競(jìng)爭(zhēng)法(competitive ELISA)
        樣本里的抗原(自在抗原)和純化并固定在固相載體上的抗原(固定抗原)一同競(jìng)爭(zhēng)一樣的抗體,當(dāng)樣品里的自在抗原越多,就能夠越多的抗體,而固定抗原就只能到較少的抗體,反之亦然。經(jīng)清潔過程,洗去自在抗原和抗體的復(fù)合物,只留下固定抗原和抗體的復(fù)合物,拿來與只要固定抗原的對(duì)照組成果相比擬,依據(jù)呈色區(qū)別就可計(jì)算出樣品里的抗原含量。
        優(yōu)勢(shì):可適用比擬不純的樣本,并且數(shù)據(jù)再現(xiàn)性很高。
        缺陷:全體的敏感性和專一性都較差。
        ELISA技術(shù):
        根據(jù)細(xì)胞法(cell-based ELISA):
        是一種新的定性蛋白檢測(cè)技術(shù),將細(xì)胞直接在微孔板里培育,待檢測(cè)時(shí),不需抽提蛋白和裂解細(xì)胞,便可直接丈量微孔板里蛋白經(jīng)影響或抑制作用后的改變。
        優(yōu)勢(shì):無(wú)需裂解細(xì)胞,所以方針蛋白丟失zui少,可測(cè)定完好細(xì)胞、黏附細(xì)胞、還有非粘附細(xì)胞。
        缺陷:不能測(cè)定抗原量。