DMEM培養(yǎng)基是一種含各種氨基酸和葡萄糖的培養(yǎng)基,是在MEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上研制的。與MEM比較增加了各種成分用量,同時又分為高糖型(低于4500mg/L)和低糖型(低于1000mg/L)。高糖型有利于細(xì)胞停泊于一個位置生長,適于生長較快、附著較困難腫瘤細(xì)胞等。
比較MEM和DMEM培養(yǎng)基對破骨細(xì)胞前體細(xì)胞RAW264.7分化的影響。
方法:
?。?)根據(jù)培養(yǎng)基以及是否包括核因子2B配體的受體因子激活劑(RANKL)將細(xì)胞分組:M-MEM培養(yǎng)基組,補(bǔ)充AN-MEMRANKL的培養(yǎng)基組,高葡萄糖DMEM培養(yǎng)基組,高補(bǔ)充糖DMEM培養(yǎng)基組RANKL;
(2)在培養(yǎng)的第三天收集細(xì)胞,并監(jiān)測與分化相關(guān)的標(biāo)志物酒石酸抗性酸性磷酸酶(TRP)和qPCR以及通過Western印跡激活的T細(xì)胞的活性成分。核因子κB受體激活分裂因子(核因子1b,RANK受體衰減劑)和組織蛋白酶(組織蛋白酶)KmRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平以及成年成骨細(xì)胞生成成骨細(xì)胞后成骨細(xì)胞的RW47的RWAnPlastRNAKAAls。關(guān)于破骨細(xì)胞分化為M-MEM的研究和高糖的結(jié)果進(jìn)行了研究。
結(jié)果:
(1)與添加了RANKL的高葡萄糖DMEM培養(yǎng)基相比,通過RANKL偶聯(lián)的MEM培養(yǎng)基的RAWmRNA表達(dá)水平為64.7。增加細(xì)胞中TRP,NFATC1,RANK和組織蛋白酶K,TRP,NFATC1和組織蛋白酶K的蛋白質(zhì)表達(dá)水平;
?。?)通過向培養(yǎng)基或高葡萄糖DMEM培養(yǎng)基中添加R-MEM,可以將RAW264.7細(xì)胞分化為成年的破骨細(xì)胞,但是在RANKL處理的MEM培養(yǎng)基中會產(chǎn)生成熟細(xì)胞。更多的骨細(xì)胞。結(jié)論在RAW264.7細(xì)胞中加入RANKLM-MEM培養(yǎng)基分化為破骨細(xì)胞是有益的。