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熒光定量PCR檢測技術(shù)服務(wù)-Taqman探針法

簡要描述:熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出,由于該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規(guī)PCR相比,它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點,目前已得到廣泛應(yīng)用;實時熒光定量PCR:在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,Z后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。

  • 產(chǎn)品型號:
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時間:2024-05-13
  • 訪  問  量:5833

實時熒光定量PCR技術(shù)(Real Time Quantitative PCR)

在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,zui后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。

相對定量應(yīng)用(Relative Quantification,RQ)    

 特異性熒光標(biāo)記:

 TaqMan法

 TaqMan探針的特性:

(1)5′端標(biāo)記有報告基團(tuán)(Reporter, R),如FAM、VIC等

(2)3′端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán) (Quencher, Q)

(3)探針完整,R所發(fā)射的熒光能量被Q基團(tuán)吸收 ,無熒光, R與Q分開,發(fā)熒光

(4)Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性,可水解探針

相對定量通過內(nèi)標(biāo)定量:
內(nèi)標(biāo)(Endogenous Control)通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因,在細(xì)胞中的表達(dá)量或在基因組中的拷貝數(shù)恒定,受環(huán)境因素影響小,內(nèi)標(biāo)定量結(jié)果代表了樣本中所含細(xì)胞或基因組數(shù)量。

相對定量分析方法  :

 2-ΔΔCt
前提:目標(biāo)序列和內(nèi)參序列的擴增效率接近100%且偏差在5%以內(nèi)
  1、用內(nèi)參基因的CT值歸一目標(biāo)基因的CT值:
    ΔCT(test)= CT(target,test)-CT(ref,test) 
    ΔCT(calibrator)= CT(target,calibrator)-CT(ref, calibrator) 
  2、用校準(zhǔn)樣本的ΔCT值歸一試驗樣本的ΔCT值:
         ΔΔCT= ΔCT(test) - ΔCT(calibrator)
  3、計算表達(dá)水平比率:
                    2 –ΔΔCT=表達(dá)量的比值

服務(wù)流程:

步驟

客 戶 提 供

服 務(wù) 內(nèi) 容

基 屹 提 供

1

新鮮的且盡量多的材料;已知的全長基因序列;盡可能詳細(xì)的背景資料:DNA/ RNA來源、豐度等。

DNA/RNA提取,根據(jù)基因序列設(shè)計特異性的引物和熒光探針。

 

2

純化好的DNA/RNA(大于5 ug/樣品);已知的全長基因序列;盡可能詳細(xì)的背景資料:DNA/ RNA來源、豐度等。

根據(jù)基因序列設(shè)計特異性的引物和熒光探針。

 

3

 

以DNA為模板,對目的基因進(jìn)行熒光定量PCR檢測分析

提供完整的定量分析結(jié)果、實驗熒光定量擴增曲線及詳細(xì)的實驗步驟。

注意:客戶可根據(jù)所能提供的起始材料不同,選擇從步驟1或2啟動項目。

       

 

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