簡要描述:質粒DNA抽提通常是指從大腸桿菌中進行小量質粒的快速抽提的方法,通過試劑盒采用新型的離子交換柱,在特定條件下,使質粒能在離心過柱的瞬間,結合到質粒純化柱上,在一定條件下又能將質粒充分洗脫,從而實現(xiàn)質粒的快速純化。無需酚氯仿抽提,無需酒精沉淀,12個樣品只需不足30分鐘即可完成。
質粒DNA抽提:
通常是指從大腸桿菌中進行小量質粒的快速抽提的方法,通過試劑盒采用新型的離子交換柱,在特定條件下,使質粒能在離心過柱的瞬間,結合到質粒純化柱上,在一定條件下又能將質粒充分洗脫,從而實現(xiàn)質粒的快速純化。無需酚氯仿抽提,無需酒精沉淀,12個樣品只需不足30分鐘即可完成。
質粒DNA抽提效率:
1.每個質粒純化柱可以結合的質粒量的上限約為20微克。
2.每個純化柱可用于抽提1-5毫升用LB培養(yǎng)的大腸桿菌。
3.抽提所得質粒的OD值一般在1.80左右。
4.抽提獲得的質粒量會受質粒拷貝數(shù)等因素影響。
5.抽提獲得的質粒DNA的OD值也會因菌種不同等原因而略有波動。
用途:
質??芍苯佑糜谵D染細胞,DNA測序,PCR,基于PCR的突變,體外轉錄,轉化細菌,內切酶消化等。
所需試劑:溶液I(懸浮液),溶液II(裂解液),溶液III(結合液),溶液IV(洗滌液),溶液V(洗脫液),RNase A(100mg/ml),質粒純化柱,廢液收集管等
保存條件:
室溫保存,一年有效。
注意事項:
1.*次使用前把試劑盒提供的RNase A全部加到溶液I(懸浮液)中,混勻,并在瓶上做好標記。加入RNase A后4℃存放。
2.*次使用前在每瓶溶液IV(洗滌液)中加入54ml無水乙醇,混勻,并在瓶上做好標記。
3.溫度較低時,溶液II和溶液III可能會有沉淀產生。使用前必須檢查一遍。如有沉淀,37℃水浴加熱溶解,混勻后使用。溶液II請勿過分劇烈混勻,否則會產生大量氣泡。
4.溶液II使用完后,一定要蓋緊瓶蓋,防止被空氣中二氧化碳酸化。
5.溶液II有強堿性,溶液II和溶液III對人體都有刺激性,操作時請小心,并注意適當防護。
6.所有操作均在室溫進行,操作時無需冰浴。所有離心也均在室溫進行。
7.廢液收集管在一次抽提中需多次使用,切勿中途丟棄。
8.為了安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。